2026-03-06
ในงานวิจัยวิทยาศาสตร์ชีวิต การทดลองทางยาและพิษวิทยา และการวินิจฉัยโรคห้องตัดเชื้อสัตว์และเก็บตัวอย่างเนื้อเยื่อทําหน้าที่เป็นสะพานสําคัญระหว่างการทดลองใน vivo และการวิเคราะห์ข้อมูลด้านล่างและประสิทธิภาพของการควบคุมความปลอดภัยทางชีวภาพ กําหนดโดยตรงความสมบูรณ์ของตัวอย่างการทดลองและความน่าเชื่อถือของข้อมูลการวิจัย.
บทความนี้วิเคราะห์ข้อพิจารณาทางเทคนิคสําคัญของห้องทดลองการตัดเชื้อสัตว์และการเก็บตัวอย่างที่ทันสมัยจากสามมุมมอง:การปรับแต่งสถานที่, ขั้นตอนการทํางานแบบมาตรฐาน และการควบคุมความปลอดภัยทางชีวภาพ.
I. การตั้งค่าการทํางานหลักของห้องตัดและเก็บตัวอย่าง
ห้องวิเคราะห์และเก็บตัวอย่างสัตว์มืออาชีพต้องรองรับกระบวนการทํางานทั้งหมด จากการฆ่าตายและการเผชิญหน้าอวัยวะ ไปยังการติดตั้งเนื้อเยื่อและการกําจัดขยะตามมาตรฐานการก่อสร้างห้องปฏิบัติการปัจจุบัน, การจัดตั้งหลักรวมถึงสองด้านต่อไปนี้:
1โครงสร้างพื้นฐานและแพลตฟอร์มการทํางาน
ขั้นตอนการตัดเชื้อควรทําบนโต๊ะตัดเชื้อพิเศษหรือโต๊ะตรวจศพอากาศแรงดันลบสําหรับสัตว์ทดลองขนาดเล็กและกลาง (เช่นหนูและกระต่าย)โต๊ะชํารุดศพอากาศแรงดันลบได้กลายเป็นการตั้งค่าแบบมาตรฐาน
ระบบเหล่านี้ใช้อุปกรณ์บําบัดก๊าซออกและก๊าซแรงดันลบเพื่อกําจัดก๊าซอินทรีย์และกลิ่นอย่างมีประสิทธิภาพ เช่นโฟมัลดีไฮด์และเมธีลเมอร์คัปตันสร้างขึ้นในระหว่างการเจาะ เพื่อปกป้องผู้ประกอบการจากการเผชิญหน้ากับอะโรโซลที่เป็นอันตราย
พื้นที่ทํางานยังควรมี:
อินเตอร์เฟซการออกของก๊าซสลบ
ระบบแสงท้องถิ่น
ตู้ sterilization อุปกรณ์
2อุปกรณ์เก็บตัวอย่างและการกําจัดขยะ
การเตรียมเครื่องมือ
อุปกรณ์การเจาะที่พบทั่วไปประกอบด้วย:
บอร์ดติดตั้งสัตว์
เครื่องตัดเลื่อยผ่าตัดขนาดต่าง ๆ (เครื่องตัดเลื่อยตา, เครื่องตัดเลื่อยเนื้อเยื่อ)
มีดผ่าตัด
เครื่องกั้นฟันและ เครื่องกั้นฟันไม่
เครื่องจับเลือด
เครื่องตัดกระดูก
กําหนดการและสมดุลอิเล็กทรอนิกส์สําหรับการวัดอวัยวะ
การจัดการขยะ
ตามกฎระเบียบด้านความปลอดภัยทางชีวภาพของสัตว์ทดลอง, พื้นที่ตัดต้องมี:
ถุงขยะอันตรายทางชีวภาพสีเหลืองสําหรับศพและอวัยวะสัตว์
กระป๋องกระป๋องสําหรับเข็มและเล็บที่ใช้ไปแล้ว
วัสดุเหล่านี้ไม่ควรผสมผสานกับขยะครัวเรือนทั่วไป.
II. ขั้นตอนการตัดเชื้อและการเก็บตัวอย่างเนื้อเยื่อแบบมาตรฐาน
เพื่อปรับปรุงความสามารถในการผลิตแบบทดลองและลดศิลปะที่เกิดจากการจัดการที่ไม่ถูกต้อง การเจาะและการเก็บตัวอย่างเนื้อเยื่อต้องปฏิบัติตามระเบียบเทคนิคที่เข้มงวด
1การเตรียมตัวก่อนการผ่าตัดและการจัดการสัตว์
การวางยาเสพติดสัตว์หรือการฆ่าสัตว์ตายต้องจบอย่างรวดเร็ว เพื่อหลีกเลี่ยงการตอบสนองความเครียดที่ยาวนาน ความเครียดที่มากเกินไปอาจเปลี่ยนแปลงกิจกรรมของเอนไซม์ในเนื้อเยื่ออัตโนลิสซึ่งอาจส่งผลต่อความแม่นยําของการสังเกตด้วยกล้องจุลินทรีย์แสง หรือกล้องจุลินทรีย์อิเล็กตรอน.
การตรวจสอบภายนอก
ก่อนการผ่าตัด พื้นผิวร่างกายของสัตว์ควรตรวจสอบอย่างเป็นระบบ รวมถึง:
ช่องทางธรรมชาติ (ปาก จมูก จมูก) สําหรับสารสกัดที่ผิดปกติ
สภาพและความสว่างของผม
การมีอาการบาดเจ็บ, ผื่น หรือแผล
การสังเกตเหล่านี้มักจะสะท้อนสภาพทางกายภาพหรือทางโรค ก่อนการตาย.
2การเผชิญหน้าต่อเนื้อเยื่อและการสังเกตอวัยวะ
แนวทางการแยก
สัตว์มักจะติดตั้งในสถานที่นอนหลับและช่องท้องและช่องหน้าอกจะเปิดไปตามการตัดเส้นกลาง.
ควรบันทึกข้อสังเกตต่อไปนี้:
การมีของเหลว, เลือด, หรือการติดตามในช่อง
ขนาด, สี, และ เนื้อเยื่อของอวัยวะ
อาการแผลหรือความผิดปกติที่เห็นได้ชัด
เอกสารการบาดเจ็บ
สําหรับสัตว์ตัวอย่างที่มีลักษณะทางโรคเฉพาะเจาะจง (เช่นเนื้องอกหรือบริเวณที่ตาย) การบาดเจ็บควรถูกอธิบายอย่างเป้าหมาย รวมถึง:
สถานที่
รูปทรง
สี
ขนาด (แม่นยําเป็นมิลลิเมตร)
ความสัมพันธ์กับเนื้อเยื่อรอบ ๆ
3รายละเอียดเทคนิคสําหรับการเก็บตัวอย่างเนื้อเยื่อ
ขั้นตอนการเก็บตัวอย่างที่ถูกต้องมีความสําคัญต่อคุณภาพของตัวอย่าง ต้องปฏิบัติตามหลักการทางเทคนิคต่อไปนี้
การควบคุมความเร็วและอุณหภูมิ
หลังจากการถอนเนื้อเยื่อทันทีจมลงไปในสารปรับที่เย็นก่อน (มัก 4 °C).
การเผชิญกับอุณหภูมิห้องอย่างยาวนานอาจนําไปสู่การปล่อยเอนไซม์ไฮดรอลิสต์ภายในเซลล์ ซึ่งอาจทําลายโครงสร้างเซลล์
เมื่อจําเป็น, การตัดสามารถดําเนินการกระเป๋าน้ําแข็งหรือกระเป๋าสตางค์เย็น.
ความต้องการขนาดตัวอย่าง
ตัวอย่างกล้องจุลินทรีย์อิเล็กตรอน:ปกติไม่ใหญ่กว่า1 mm3เนื่องจากการเจาะเข้าไปของสารปรับช้า
หมวดปาราฟีนประจําการ:ความหนาของเนื้อเยื่อควร3 ละ 5 มม., ขนาดที่แนะนํา1.5 ซม × 1.5 ซม.
มาตรฐานการใช้เครื่องมือ
การตัดต้องทําด้วยใบมีดคม.
ต้องหลีกเลี่ยงการดึง, ตัด, หรือกดด้วยเครื่องมือที่ค่อนข้างบด เพื่อป้องกันความเสียหายทางกล
เมื่อถือเนื้อเยื่อเครื่องจับที่ไม่มีฟันควรจับเนื้อเยื่อเชื่อมรอบ ๆ แทนที่จะจับเนื้อเยื่อเป้าเพื่อป้องกันการบิดเบือนของเซลล์
III สถานที่เก็บตัวอย่างมาตรฐานสําหรับอวัยวะสําคัญ
เพื่อให้แน่ใจว่าการเปรียบเทียบระหว่างการทดลองตามแนวทางห้องปฏิบัติการที่ออกมาจากสถาบัน เช่นRWD วิทยาศาสตร์ชีวิตและ Meifengli, แนวทางการเก็บตัวอย่างแบบมาตรฐานประกอบด้วย
สมอง:ช่องข้ามจากสมองหน้า (ล็อบหน้าตา) สมองกลาง (ล็อบหาง) และสมองเล็กต้องการจุดตัวอย่างเฉพาะสําหรับการสังเกต hippocampal
หัวใจ:ตัดยาวจากหัวหูไปยังจุดสูงสุดเพื่อเปิดเผยบริเวณบริเวณบริเวณบริเวณบริเวณบริเวณบริเวณบริเวณบริเวณบริเวณบริเวณบริเวณบริเวณบริเวณบริเวณ
ตับ:เลือกทั้งล็อบใหญ่ที่สุด (เช่น ล็อบซ้าย)และล็อบเล็กที่สุด (ตัวอย่างเช่น ล็อบหาง).เนื้อเยื่อควรได้รับตัวอย่าง5 มิลลิเมตรจากขอบรวมทั้งแคปซูลและพารีนไคม่า
ตับ:
กลีบไตซ้าย: ผ่าตัดตรงข้ามผ่านมุมกระดูก เพื่อเปิดเผยกระดูกเพลส, กลีบกระดูกเพลส, และสมอง
กลีบไตขวา: ช่องยาวรวมกับกลีบ
ระบบทางเดินอาหาร:
ท้อง: ตัวอย่างตามความโค้งที่ใหญ่ขึ้นจากหัวใจไปยังลูกไพโลรัส.
อุจจาระ: ส่วนจากหมื่นสองลูกหมาก, หมากขน (รวมกับรอย Peyer's patches), หมากขน, และลําไส้ใหญ่ภายในควรถอนออกและเนื้อเยื่อที่เรียบบนกระดาษกรอง ก่อนการติดตั้งเพื่อป้องกันการ curling
IV ความปลอดภัยทางชีวภาพและการจัดการขยะ
สําหรับการผ่าตัดที่เกี่ยวข้องกับโรคเชื้อสูง(ตัวอย่างเช่น โรคในตัวแบบสัตว์อันดับต้น ๆ ที่ไม่ใช่มนุษย์)ห้องปฏิบัติการความปลอดภัยทางชีวภาพระดับสูง.
ตามแนวทางทางเทคนิคด้านความปลอดภัยทางชีวภาพในการตัดสัตว์, การควบคุมดังต่อไปนี้ควรนําไปใช้:
1การคุ้มครองบุคลากร
ผู้ประกอบการต้องสวม:
เครื่องหายใจ N95 หรือเครื่องหายใจระดับสูงกว่า
เครื่องป้องกันหน้า
ถุงมือคู่
ชุดกันน้ํา
มาตรการป้องกันเหล่านี้ช่วยป้องกันการติดเชื้อที่เกิดจากการกระจายของเหลวในร่างกาย หรือการเผชิญหน้ากับอะโรโซล.
2การควบคุมสิ่งแวดล้อม
การผ่าตัดควรทําในสภาพแวดล้อมความดันลบที่การไหลผ่านของอากาศระบบกรอง HEPA ก่อนการปล่อย.
3การกําจัดศพ
หลังจากการทดลอง
เนื้อสัตว์และวัสดุที่ติดเชื้อต้องอัตโนมัติหรือเก็บไว้ในเครื่องเย็นขยะทางการแพทย์อุณหภูมิต่ํา.
การกําจัดครั้งสุดท้ายควรดําเนินการสํานักงานรับอนุญาตในการบําบัดขยะทางการแพทย์โดยการเผาไหม้.
V. การคัดเลือกและการใช้สารติดตั้ง
การติดตั้งคือขั้นตอนสําคัญหลังจากการเก็บตัวอย่างเนื้อเยื่อ, มีเป้าหมายในการทําให้โครงสร้างเซลล์มั่นคงและป้องกันการทําลายและการละลายของอินซิม
เป้าหมายการวิจัยที่แตกต่างกันต้องการสารปรับที่แตกต่างกัน
| ประเภทการติดตั้ง | ลักษณะสําคัญ | การใช้งานทั่วไป |
|---|---|---|
| 10% โฟมัลลีนเซลฟ์เซลฟ์ | การเจาะเข้าไปอย่างแข็งแกร่ง มีรูปร่างที่มั่นคงนาน | โรคธรรมดา (การสี H&E) อินมูโนฮิสโตเคมี |
| 4% ปาราฟอร์มัลเดฮีด (PFA) | รักษาความเป็นแอนติเจน | อินมูโนไซโตเคมี การติดป้ายด้วยแสงสว่าง |
| กลูตาราลดีฮีด | การติดตั้งอย่างรวดเร็ว รักษากิจกรรมเอนไซม์และไมโครทูบูล | การศึกษากระบายอิเล็กตรอน |
| ออสมิอุม เททรอ็กไซด์ | ติดต่อไขมันและให้อิเล็กตรอนสี | การติดตั้งหลังสําหรับกล้องจุลินทรีย์อิเล็กตรอน |
ข้อสังเกตสําคัญ
ปริมาตรของสารประกอบ10×50 เท่าของปริมาณเนื้อเยื่อ.
ระยะเวลาการติดตั้งทั่วไปจะตั้งแต่24 72 ชั่วโมง.
สําหรับอวัยวะที่มีอากาศ (เช่นปอด)ยาปรับสภาพควรถูกฉีดเพื่อบวมเนื้อเยื่อ, รับประกันการสัมผัสอย่างเต็มที่กับสารละลาย
สรุป
และห้องตัดเชื้อสัตว์และเก็บตัวอย่างเนื้อเยื่อไม่ใช่แค่พื้นที่ศัลยกรรมทางกายภาพ แต่เป็นแพลตฟอร์มเทคนิคที่ครบวงจรการควบคุมความปลอดภัยทางชีวภาพ ระบบปฏิบัติการมาตรฐาน (SOP) และการเตรียมตัวอย่างอย่างอย่างแม่นยํา.
การดําเนินการอย่างเข้มงวดตามโปรโตคอลการเก็บตัวอย่าง การใช้อุปกรณ์การตัดเชื้อแรงดันลบมืออาชีพ, และการปฏิบัติตามระเบียบความปลอดภัยทางชีวภาพเป็นสิ่งสําคัญในการ:
รับประกันความแม่นยําและความสามารถในการผลิตข้อมูลทางวิทยาศาสตร์
ปรับปรุงการจัดการความปลอดภัยทางชีวภาพในห้องปฏิบัติการ
การปรับปรุงคุณภาพทั่วไปของการวิจัยทดลอง